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超微量分光光度計(jì)的7個(gè)關(guān)鍵操作技巧與常見誤區(qū)

  • 更新時(shí)間2025-09-19
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     關(guān)鍵操作技巧
  樣品預(yù)處理與均勻性:確保樣品充分混合,避免沉淀或顆粒導(dǎo)致吸光度波動。例如,核酸樣品需低速離心去除氣泡,蛋白質(zhì)樣品需避免表面張力變化影響液柱形成。
  微量加樣控制:僅需1-2μL樣品,使用移液器精準(zhǔn)加樣至檢測平臺中心,防止液體外溢或殘留。對于高粘度樣品,可適當(dāng)增加加樣量至2-3μL。
  基線校準(zhǔn):每次測量前用空白溶劑(如水或緩沖液)調(diào)零,尤其更換溶劑類型或長時(shí)間未使用時(shí),避免殘留物干擾光路。
  波長與模式選擇:根據(jù)檢測目標(biāo)選擇波長(如核酸選260nm,蛋白質(zhì)選280nm),并匹配對應(yīng)算法(如dsDNA、ssDNA、RNA或BSA蛋白模式)。
  避免光路干擾:測量時(shí)關(guān)閉樣品室蓋子,防止外界光線干擾;同時(shí)遠(yuǎn)離強(qiáng)光、強(qiáng)氣流或電磁場環(huán)境。
  重復(fù)測量與數(shù)據(jù)平均:對同一樣品進(jìn)行3次測量并取平均值,減少偶然誤差,提升結(jié)果可靠性。
  清潔與維護(hù):測量后立即用無塵紙或乙醇清潔檢測平臺,避免交叉污染;定期檢查光源壽命(鹵素?zé)艏s2000小時(shí)),及時(shí)更換老化組件。
  常見誤區(qū)與解決方案
  樣品污染:若260/230比值低于1.8,可能存在有機(jī)溶劑(如苯酚)污染。需重新純化樣品,并用去離子水清潔檢測基座。
  吸光度不穩(wěn)定:由樣品未覆蓋檢測表面或氣泡導(dǎo)致。應(yīng)確保液滴覆蓋光纖表面,并使用“平滑數(shù)據(jù)”功能處理波動讀數(shù)。
  濃度與預(yù)期不符:高濃度樣品(如A260>2.0)可能超出線性范圍,需稀釋后復(fù)測;同時(shí)結(jié)合多波長比值(如A260/A280)評估純度,避免單一代數(shù)值誤判。
  環(huán)境干擾:溫度波動或陽光直射會影響光源穩(wěn)定性。建議將儀器置于恒溫環(huán)境(如25℃±2℃),并避免陽光直射。
  軟件報(bào)錯(cuò)或連接故障:常見于驅(qū)動程序不兼容或USB接口松動。需更新軟件至最新版本,并檢查接口連接是否穩(wěn)固。

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